柱前衍生高效液相色谱法测定血管紧张素氨基酸组成,此文是一篇血管紧张素论文范文,为你的毕业论文写作提供有价值的参考。
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摘 要 目的：建立一种测定血管紧张素氨基酸组成的柱前衍生高效液相色谱法.方法：血管紧张素经酸水解产生的游离氨基酸,用AQC衍生后,以醋酸钠溶液和乙腈作为流动相,流速为1.0 ml/min,经AccQ·Tag色谱柱梯度洗脱,于波长254 nm处测定.通过外标法计算样品中氨基酸组成.结果：His、Arg、Pro、Tyr、Val、Phe在浓度范围0.02～1.00 mmol/ml内和峰面积呈良好的线性关系,Asp在0.02～0.75 mmol/ml浓度范围内和峰面积呈良好的线性关系.结论：本实验建立的分析方法分离效果较好,可用于血管紧张素氨基酸组成测定和肽含量测定.
关键词 血管紧张素 氨基酸组成 肽含量 HPLC
中图分类号：O657.72； TQ460.72 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2018）11-0098-05
Determination of amino acid composition of angiotensin amide by HPLC with precolumn derivation
DING Jinguo*, LI Xiaoqian, HUANG Zhenhui（SPH NO.1 Biochemical & Pharmaceutical Co., Ltd., Shanghai 200240, China）
ABSTRACT Objective： To establish an HPLC method with precolumn derivation to determine amino acid composition and peptide content of angiotensin amide. Methods： The free amino acids were derivatized with AQC after angiotensin amide was hydrolyzed by hydrochloric acid. The derivatives were eluted by gradient solutions composed of sodium acetate solution and acetonitrile on HPLC at flow rate of 1.0 ml/min and detective wavelength of 254 nm. The contents of amino acids in angiotensin amide were calculated based on external standard. Results： The standard curves were linear over the concentration range of 0.02～1.00 mmol/ml for His, Arg, Pro, Tyr, Val, and 0.02～0.75 mmol/ml for Asp. Conclusion： The method is suitable for the analysis of amino acid composition and peptide content of angiotensin amide.
KEy WORDS angiotensin amide； amino acid composition； peptide content； HPLC
氨基酸是多肽藥物最基本的组成单位,氨基酸组成分析可以测定多肽药物的氨基酸组成,确定多肽的肽含量,初步确定多肽药物的化学结构,对评价多肽药物质量具有重要意义[1].进行多肽类药物的氨基酸组成分析,需先将样品水解成游离氨基酸,但大多数氨基酸不含有生色基团,无法用常规的紫外检测器直接检测.在此情况下,通常可采用高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培法直接分离、测定[2],或将游离氨基酸转化为具有较强紫外或荧光吸收的衍生物,使其有利于测定或分离.AQC（6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺碳酸盐）能和一、二级氨基酸在柱前进行衍生化,反应迅速、产物稳定,并可通过紫外检测器检测.
血管紧张素能直接作用于动脉血管平滑肌上的特异性受体,使小动脉强力收缩,升压活性高于去甲肾上腺素[3-6]；它也是一种超短效的静脉注射用血管收缩剂,起效快,作用消除也快.可快速精确地控制血压,而治疗剂量无快速耐受性,注射部位渗漏不会引起组织坏死,给药期间无心悸、心律失常、尿量减少等不良反应.因此,它在手术麻醉,特别是产科麻醉、高血压患者麻醉、心脏手术、败血性休克急救及血管紧张素转化酶抑制剂中毒治疗中有重要作用[7-11].我们对血管紧张素进行了质量研究,建立了基于多肽工作对照品的HPLC含量测定方法,但不能测定氨基酸组分[12].氨基酸组成分析研究是评价多肽药物结构的重要手段,血管紧张素是由7种氨基酸组成的8肽药物,鉴于其不含Cys（半胱氨酸）和Try（色氨酸）,可采用酸水解法进行水解,并以AQC为柱前衍生化试剂,应用HPLC-UV法建立血管紧张素的氨基酸组成分析方法.氨基酸组成分析方法也可用于含量测定,无需多肽工作对照品,可丰富血管紧张素含量测定手段.
1 材料和方法
1.1 材料
血管紧张素（自制）；混合氨基酸标准溶液（各氨基酸含量除Cys为1.25 mmol/ml外,余均为2.5 mmol/ml）、AccQ·Tag色谱流动相A、B和衍生试剂盒（包括AQC衍生试剂粉末及稀释剂、硼酸缓冲液）均购自Waters科技有限公司.
1.2 仪器
Waters 2695高效液相色谱仪、自动进样器、Waters 2489型UV/Vis检测器和Empower 2数据处理系统（Waters科技有限公司）；XS-205 DU十万分之一天平（梅特勒-托利多公司）；TYXH-1旋涡混合器（上海比朗仪器有限公司）；CS101-2E鼓风干燥烘箱（重庆四达科学仪器有限公司）；真空干燥箱（上海一恒科技有限公司）.
结论：关于血管紧张素方面的的相关大学硕士和相关本科毕业论文以及相关血管紧张素高的原因论文开题报告范文和职称论文写作参考文献资料下载。
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