α—淀粉酶对类黄酮抗氧化活性影响,此文是一篇类黄酮论文范文,为你的毕业论文写作提供有价值的参考。
类黄酮论文参考文献：
类黄酮的化学结构及其取代基的位置基本决定了它们的抗氧化效果.目前广泛认为,B环是类黄酮抗氧化能力、清除自由基的重要活性部位,一般情况下,B环上羟基基团越多,其生物活性就越强.而羟基基团的糖苷化和2、3位双键氢化都容易引起类黄酮生物活性的降低.
该文通过采用氧自由基清除能力（oxygen radicalabsorbance capacity,ORAC）评价法、DDPH自由基清除法、抗亚油酸氧化法、还原能力法四种不同的抗氧化活性评价方法,旨在测定类黄酮在加入PPA溶液前后,类黄酮抗氧化能力的变化情况.
材料和仪器
PPA购自于Sigma公司；类黄酮（木犀草素、香叶木素、柚皮素、二氢杨梅素、山奈酚、槲皮素）购自陕西慧科植物开发有限公司,纯度达98%；荧光素钠,维生素E水溶性类似物Trolox,2,2’-偶氮二异丁基脒二盐酸盐（2,2’-Azobis（2-methylp ropionamidine）dihyd rochIo ride,AAPH）,1,1-二 -2-三硝基苯肼（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-diphenyl-1-（2,4,6-trinitrophenyl）hydrazyl,DDPH）,亚油酸均购自于Sigma公司,其余试剂均为国产分析纯,所有溶液均用等离子水配制,并用0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（phosphatebuffer saline,PBS）以保持pH6.8±0.02的生理条件.
全波长扫描式多功能酶标仪,紫外可见分光光度计数显,恒温水浴锅,pH值精度计,超声细胞粉碎器,数控超声波清洗器
试验方法
PPA对类黄酮ORAC体系抗氧化能力的影响.称取1mg类黄酮（木犀草素、香叶木素、柚皮素、二氢杨梅素、山奈酚、槲皮素）溶于2mL二 亚砜,得到0.5mg/mL的类黄酮储备液.取10μL类黄酮储备液和9901JLPPA液（溶于pH7.4的PBS缓冲液,0.328U/mL）、990mLpH7.4的PBS缓冲液,混匀于37℃反应30min,分别得到1mL两组样液并加以标记为样液1和样液2.同时,将类黄酮储备液换成等体积的二 亚砜作同样处理,作为对照以排除二 亚砜对整个试验结果的影响.
在96微孔平板中依次加入20μL上述两种样液、对照液和五种不同浓度的Trolox标准溶液,板的边缘孔均加入等体积的pH7.4的PBS缓冲液；然后每孔加入200pL的已配置好的荧光素钠盐溶液（现配现用）,再运用Wallace1420Manager软件设定测定程序,自动混匀,在37℃条件下预热20min；待96孔平板出机后,迅速加入20μLAAPH（现配现用）,自动混匀,仪器开始自动测定.在激发波长485nm,吸收波长535nm条件下,每隔2min记录一次荧光强度值,每次纪录前自动震荡混匀8s,共测定60个循环,荧光强度分别记录为f1,f2,f3,等,f60；利用相应软件计算AUC值,再计算ORAC值.则PPA对类黄酮ORAC体系抗氧化能力的抑制率算术公式如下：
PPA对类黄酮清除DDPH自由基的影响.准确称取20mgDDPH粉末,用无水乙醇溶解并定容至250mL,得到摩尔浓度为2×10-4mol儿的DDPH乙醇混合液,现配现用.
将类黄酮（木犀草素、香叶木素、柚皮素、二氢杨梅素、山奈酚、槲皮素）溶于无水乙醇,得到20,40,60,80,100μg/mL不同浓度的类黄酮溶液.取50HL上述不同浓度的类黄酮溶液和0.2mLPPA液（溶于pH6.8的PBS缓冲液,0.328U/mL）混合并于37℃水浴30min,再加入3mL的2×10-4mol/L的DDPH乙醇混合液,混匀后,在黑暗处室温条件下静置30min.用无水乙醇作为参比液,在517nm处测定样品的吸光值.对照组为将PPA液换成等量的PBS缓冲液；空白组为将黄酮液换成等量的无水乙醇,平行测定三次.则通过拟合曲线可得类黄酮加入PPA溶解液前后的半抑制浓度UC50值,以及PPA对黄酮抗亚油酸氧化的抑制率的算术公式如下：
PPA对类黄酮抗亚油酸氧化的影响.称取亚油酸0.6g,吐温-20 0.5g溶于150mL pH 6.8 0.2mol儿的PBS缓冲液中,在超声细胞粉碎器下工作20min,得到均一体系的混合液.
将0.2mL0.1mg/mL的黄酮液（溶于二 亚砜）,不同酶活力的PPA液先混合37℃水浴30min,再加入上述混合液2.5mL,5mL20mMAAPH反应液混合均匀于反应器中恒温水浴70min.
取出上述反应液0.1mL于具塞试管中,加入4.7mL乙醇（75%）,0.1mL硫氰酸铵（30%）和0.1mLFeCl2（20mM,溶于3.5%HCl中）混匀,在500nm处测得吸光度值A500（以75%乙醇作参比液）.对照组为将PPA液换成等量的PBS缓冲液；空白组为将黄酮液换成等量的二 亚砜液,平行测定三次.则PPA对黄酮抗亚油酸氧化的抑制率的算术公式如下：
PPA对类黄酮还原能力的影响.将0.05mg/mL100μL黄酮液（溶于二 亚砜）和不同酶活力的PPA液混合于37℃恒温水浴锅内水浴30min,依次加入2.5mL0.2mol/L的PBS缓冲液和2.5mL已配置好质量分数为1%的K3Fe（CN）6,再置于50℃水浴锅内保温20min后,快速冷却,加入2.5mL质量分数10%三氯乙酸溶液,以3000r/min的转速离心10min,取离心后的上清液2.5mL,依次加入4mL蒸馏水,1mL质量分数0.1%三氯化铁溶液,充分混匀,静置10min后,在700nm下测定其吸光度A700（以蒸馏水为参比液）.对照组为将PPA液换成等量的PBS缓冲液；空白组为将黄酮液换成等量的二 亚砜液,平行测定三次.则PPA对黄酮还原力的抑制率I的算术公式如下：
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