固液相色谱法同时检测畜禽粪便抗生素方法,这是一篇与畜禽粪便论文范文相关的免费优秀学术论文范文资料,为你的论文写作提供参考。
畜禽粪便论文参考文献：
摘 要：目的：使用固相萃取——高效液相色谱法检测畜禽粪便中的抗生素残留.方法：使用Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液（pH等于4.0）提取家禽粪便样品,经HLB固相萃取小柱纯化富集,以及高效液相色谱分离检测.结果：3信倍噪比下四环素、氟喹诺酮氨磺二甲嘧啶的检出限分别为0.20～7.20μg/kg、0.16～3.15μg/kg、0.05μg/kg,三种抗生素猪粪的加标回收率分别为60%～100%、41%～120%、94%～101%,鸡粪的加标回收率分别为70%～101%、65%～99%、115%～120%,相对标准差均在2.5%～9.3%之间.结论：固液相色谱法具较高的准确度,可对禽粪便四环素、喹诺酮及磺胺二甲嘧啶类抗生素同时检出.
关键词：家禽粪便；固相萃取；高效液相色谱
中图分类号： X132 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2016.17.026
随着社会的不断发展,家禽养殖业也逐渐向现代化方向发展,规模化、集约化的养殖方式出现,使得抗生素家禽养殖中被广泛应用[1].而抗生素在家禽体内的吸收性差,约有30%～90%的抗生素会以原药的形式随着粪便从家禽体内排除[2],对土壤及地表水源造成污染.因此需要对家禽粪便中抗生素予以分析检测,以减少抗生素对环境的污染.笔者本次主要分析固液相色谱法同时对检测畜禽粪便抗生素的方法,内容如下：
1 仪器和试剂
1.1 仪器和试剂
HLB固相萃取柱、Visiprep TM-DL固相萃取装置、WD-12氮吹仪、Agilent-1200高效液相色谱仪、ASE300加速溶剂萃取装置；土霉素、四环素、金霉素、诺氟沙星、环丙沙星、诺美沙星；甲醇、乙腈（色谱纯）柠檬酸、EDTA钠盐、NaOH等试剂为分析纯,实验用水为超纯水.
1.2溶液配制
称取各类所需抗生素1毫克分别装入10毫升容量瓶中.使用甲醇溶解四环素类、磺胺类和大环内酯类抗生素.
1.3样品采集和处理
采集新鲜家禽粪便（选择本地区规模化家禽养殖场）样品冷冻干燥后,粉碎过筛,在家禽粪便样品中加入抗生素混合标准液,涡旋震荡1分钟,常温下超声20分钟,4℃下10000转/分钟离心10分钟,取上清液10毫升,重复上述步骤2次,分别取上清液10毫升、5毫升,将三次提取上清液混合后,取5毫升予以超纯水稀释（甲醇含量<10%）,过固相萃取小柱,依次使用5毫升甲醇和5毫升 0.2mol柠檬酸溶液火化,将以上提取物以5毫升/分钟流速过柱,依次使用10毫升 5%甲醇溶液和10毫升水冲洗HLB小柱,用10毫升二氯甲烷洗脱目标抗生素,洗脱液在氮气下吹干至0.1毫升以下.加入1μg内标物质LOM,使用甲醇——水混合液定容至1毫升,供HPLC-MS/NS检定.
1.4色谱条件
采用InertsilODS-3色谱柱；流动相为乙腈（ A） 和1%乙酸（B）,流速为0.8毫升/分钟；柱温30℃；梯度洗脱程序： 0～18分钟,10% A；18～20分钟,37%,80% A.
2结果
分别在各类样品中添加四环素类、喹诺酮类、硫胺二甲嘧啶类抗生素1μg/g、5μg/g、10μg/g三个含量水平,结果显示猪粪的加标回收率分别为60%～100%、41%～120%、94%～101%,鸡粪的加标回收率分别为70%～101%、65%～99%、115%～120%.相对标准差均在2.5%～9.3%之间,说明检测方法的准确性和精密度高.
3讨论
由于家禽粪便样品复杂,含有蛋白质、碳水化合物、脂肪和各种无机成分,因此在对样品进行选择时要确保标准物的定量.而在净化步骤中,对环境样品中抗生素前处理,HLB为目前效果最佳的柱子[3].在洗脱实验中选择二氯甲烷作为洗脱机,主要是由于二氯甲烷对金霉素的洗脱率好,且洗脱下来的杂质少,使色谱图中的目标分离物和检测不受干扰.
抗生素是一种可离子化的极性有机化合物,因此流动相的pH值对抗生素物质的分离和检测非常重要,一般选择有机溶剂和缓冲液按照一定比例混合,最常见的有机溶剂为乙腈和甲醇,其对紫外线的吸收率低,缓冲液选择乙酸,主要是乙酸作为流动相的峰形好.过低的pH会降低色谱柱的使用范围,一般缓冲液的pH值控制在2～3内,流动相选择1%乙酸（pH等于2.6）.在检测时选择270毫米作为检测波长,主要使用270毫米检测波长,对四环素、氟喹诺酮氨磺二甲嘧啶三种抗生素均具有较高的响应值,且分布相对均匀.
综上所述：固液相色谱法具较高的准确度,可对禽粪便四环素、喹诺酮及磺胺二甲嘧啶类抗生素同时检出.
参考文献
[1]李艳霞,李帷,张雪莲,等.固相萃取4高效液相色谱法同时检测畜禽粪便中14 种兽药抗生素[J].分析化学研究报告,2012,40（02）：213-217.
[2]王丽,钟冬莲,陈光才,等.固相萃取——高效液相色谱——串联质谱法测定畜禽粪便中的残留抗生素[J].色谱,2013,31（10）：1010-1015.
[3]张敏,刘庆玉,敖永华.高效液相色谱——荧光检测畜禽粪污中四种氟喹诺酮类抗生素残留[J].湖北农业科学,2012,51（03）：602-604.
作者简介：王忠琴,大专学历,辉南县辉发城镇畜牧兽医站,兽医师,研究方向：动物检疫.
结论：适合畜禽粪便论文写作的大学硕士及相关本科毕业论文，相关畜禽粪便无害化处理开题报告范文和学术职称论文参考文献下载。
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